大腸桿菌轉化實驗時的注意點
大腸桿菌轉化實驗時的注意點 | 時間: May-21 15:30:57 | 分類:技術欄目
凌儀生物提供高速離心機，美國Bio-rad伯樂電泳，德國eppendorf艾本德移液器，美國ABI基因擴增儀PCR，雅培原位雜交儀，Thermo熱電離心機等實驗室儀器設備，以及Corning康寧，Axygen愛思進，Greiner格瑞拉等耗材要省錢，別錯過哦。有時候第一天涂的轉化平板、次日早晨轉化子可能長成的菌落比較大（1~2毫米以上，BL21就長得快），下一步轉化子做質粒鑒定。這個情況下可以直接挑取一塊菌苔（勿帶出培養(yǎng)基），50微升酚/氯仿懸浮菌體，放置兩分鐘，加40微升TE抽提，上層TE吸出后再氯仿抽提一次，吸取上層TE即是質粒提取液。提取的質粒可以直接用于電泳和酶切。這樣操作，可以省去轉接液體試管的培養(yǎng)步驟，至少節(jié)省6~8小時的時間。但是，要在各步驟都控制得很好的情況下才能保證提取和酶切的效果，不同的實驗室或者操作者未必能夠很方便地重復。
轉化時一定要做一個宿主菌的對照，即重組質粒涂板后再用宿主菌涂響應抗性的平板，以確定第二天長出來的克隆是否正確，我當時做了三次轉化之后才發(fā)現不成功竟然是由于BL21可以在Amp（+）的平板上面生長。
