對DNA分子做酶切時的注意事項
對DNA分子做酶切時的注意事項 | 時間: May-21 15:27:26 | 分類:技術(shù)欄目
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雙酶切制備克隆插入片段的載體，較好選擇帶有外源片段的質(zhì)粒，是否酶切完全，從電泳條帶的分子量上可以比較明確地判斷。空質(zhì)粒單切完全和雙切完全在分子量上差異不大。
在做酶切時，也可以象PCR一樣配置主反應液，每次反應前先列好反應的體系，算好需要的反應數(shù)，然后按所需反應的體系按所需反應數(shù)放大，加入buffer、酶、水，質(zhì)粒欄空缺，然后混合后按除質(zhì)粒DNA的體積分裝，然后再在每管中加入相應體積的質(zhì)粒DNA酶切，這樣做的好處如下，特別是當同時有10幾個陽性克隆需要鑒定時尤為明顯：
（1）各反應成分均一；
（2）可大大減少限制型內(nèi)切酶的使用；
（3）節(jié)省時間。
