PCR實驗常見問答
PCR實驗常見問答 | 時間: December-4 18:34:53 | 分類:技術欄目
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Q-1:
A-1:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25 ~ 30個循環。
如果循環次數太少，擴增量不足;如果循環次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45 ~
Q-2:
選擇
A-2:
特異性非常重要。20mer左右的Primer, 如果特異性高，擴增20 kbp沒有問題，但如果可能的話，建議設計30 ~ 35mer左右。使用特異性低的Primer時，會出現很多非特異性產物。
Q-3:
A-3:
50 μl的反應體系可使用2.5 U的TaKaRa
Q-4:
A-4:
模板DNA的質量是
Q-5:
是否可以對λ 噬菌體直接進行
A-5:
可以。
Q-6:
對Mammalian cell或E. coli 只進行熱處理 (
A-6:
◇ 對E. coli只進行熱處理可擴增10 kbp的DNA片段 (50 ml PCR反應液中
◇ Human細胞 (培養細胞) 如只經過熱處理，可擴增數百bp;經過Protease處理、 熱處理后的樣品，較多可擴增1 ~ 2 kbp。所以，如果要擴增長鏈DNA，建議使用經過充分精制的完整的DNA作模板。
Q-7:
使用
A-7:
可以。使用TaKaRa
